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          TUNEL技術(shù),即脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶( Terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT )介導的dUTP 缺口末端標記(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL ) 技術(shù), 是目前原位檢測細胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法, 已廣泛用于生物、醫(yī)學研究領(lǐng)域。
          TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一種用來檢測細胞凋亡(apoptosis)的分析方法.細胞凋亡有一項重要的特征為細胞內(nèi)的DNA會碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探測DNA片段的產(chǎn)生,所以可以傳達細胞凋亡的訊息.TdT為terminal deoxynucleotidyl transferase,此種酵素可以在沒有DNA模板的情形下,連結(jié)核甘酸到DNA的3'-OH處.1992年,以色列科學家Gavrieli等人將TdT引為為標定DNA片段的一個酶,自此衍生出TUNEL此項技術(shù).TUNEL的好處是可以在細胞凋亡發(fā)生的早期,即可偵測到DNA片段的產(chǎn)生,并且可以直接使用在組織切片上,觀察細胞凋亡發(fā)生的位置.所以TUNEL目前為廣泛接受與使用的一種細胞凋亡的分析方法。
      細胞凋亡的研究方法有形態(tài)學方法、DNA電泳、末端標記技術(shù)凋亡細胞膜改變分析、細胞凋亡酶學分析和流式細胞儀分析方法(flow cytometry, FCM)等。以往對細胞凋亡的研究常常采用形態(tài)學方法進行研究,如光學顯微鏡和電子顯微鏡來觀察,以出現(xiàn)凋亡小體即判斷為凋亡細胞。但這種現(xiàn)象出現(xiàn)晚,對凋亡細胞亦難以做出精確的定量分析。DNA聚合酶I、Klenow酶介導的原位末端標記技術(shù)和TdT酶介導的生物素化dUTP缺口末端標記技術(shù)(terminal oxynucleotidyl transferase mediated dUTP biotin nick end labeling, TUNEL )是近年來發(fā)展出現(xiàn)的細胞凋亡原位檢測技術(shù)。細胞凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細胞自身的染色質(zhì)或DNA被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與DNA斷裂點數(shù)目相同的3′-OH末端。原位末端標記技術(shù)可以檢測到形態(tài)改變之前的凋亡細胞,敏感性高,特異性強,為凋亡細胞計數(shù)提供了基礎(chǔ)。
      末端原位雜交/TUNEL/整體實驗/威斯騰生物
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